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呼吸道感染:病毒样本采集的重要性及规范要求



儿童呼吸道病毒感染性疾病常见,在病毒的病原诊断中,标本的采集、处理、转运和保存环节,是取得可信结果的第一步,也是基本保证。世硕新语将由中华医学会儿科学分会呼吸学组呼吸道感染协作组和《中国实用儿科杂志》编辑委员会撰写的《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议》(病毒篇),及张海邻教授对《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)》解读的关键内容摘录如下。


儿童急性呼吸道感染病毒病原诊断通常采用呼吸道标本,上呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸取物;下呼吸道标本主要包括痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液等。上呼吸道标本检出病毒能否真正反映下呼吸道感染病原尚有争论,但是由于儿童下呼吸道标本的获得存在一定困难,因此常用鼻咽吸取物和鼻咽拭子代替下呼吸道标本。
标本采集的重要性
目前有70%~80%的临床诊断和病情评估需要实验室检测结果来辅助。获得准确可靠的检验结果依赖于分析前、分析中和分析后的质量控制,通常分析前阶段所用时间约占整个分析过程的 57%,发生在分析前的误差占整个分析过程误差的70%以上。分析前阶段按时间顺序,从临床医生提出检验申请,到分析检验程序启动时终止的步骤,包括检验申请、患者准备、原始样品的采集、标本运送到实验室并在实验室内进行传输。
正确规范地采集合格的标本是分析前质量控制的重要环节。适当的标本管理对患者诊疗有决定性的影响,它是实验室准确诊断的前提,可以影响治疗决策,影响医院感染控制,影响患者住院时间、住院费用和实验室费用等。低质量标本会影响检验结果的准确性,不准确的检验结果会影响医院向患者提供最佳诊疗效果的能力。任何一个退回的检验标本,不仅会导致治疗时间的延误,还会造成再次采集标本的困难,进而影响到患者的信任,材料成本及人力成本也跟着增加,所以要强调分析前质量控制管理,提高标本的质量。
标本采集的相关问题
呼吸道标本是临床微生物实验室接收到的最常见的标本,但此类标本的采集和送检存在诸多不规范之处,影响了呼吸道感染病原的诊断。微生物学标本的选择和收集是由医护人员而不是实验室来完成的,因此,临床医护人员应知晓微生物标本采集和运送要求,协助实验室提供准确、有临床意义的结果。呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸取物、痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液等。目前,临床微生物室接收最多的标本是痰细菌培养,然而痰标本并不是诊断细菌性肺炎的最佳标本,痰标本在某种程度上都有口咽部正常菌群的污染。由于儿童很难咳出合格的痰液,痰同样不是儿童呼吸道病毒感染检测的最佳标本。
多数呼吸道病毒的主要复制部位为后鼻咽部纤毛柱状上皮细胞,其次为前鼻孔和口咽部纤毛上皮细胞,因此可用咽拭子代替痰液,且鼻咽拭子的病原检出率较口咽拭子高。鼻咽吸取物较咽拭子有更高的阳性检出率,可用于病毒核酸和病毒抗原检测,是<2岁儿童的首选
咽拭子的采集
包括鼻咽拭子和口咽拭子。多数呼吸道病毒的主要感染复制部位为后鼻咽部纤毛柱状上皮细胞,其次为前鼻孔和口咽部纤毛上皮细胞,因此,鼻咽拭子的病原检出率较口咽拭子高?。在操作前应向患儿及家长做好解释工作。

采集鼻咽拭子时,应先清除鼻腔前端的分泌物,将拭子由鼻腔插入,沿鼻腔壁伸入鼻咽部直至感到一定阻力时,转动数次,然后将拭子取出。采集时,拭子应朝向耳方向而不是头顶方向。
采集口咽拭子时,患儿先用生理盐水漱口,对于漱口不合格者,可嘱患儿少量饮水吐出或咽下;嘱患儿张口 发“啊”音,以暴露口咽部,必要时用压舌板压住患儿舌部,拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,适度用力抹拭咽后壁和两侧扁桃体部位,并适当 旋转以增加接触面积,注意避免触及舌部。咽拭子应置入VTM或其他缓冲液中?。
植绒拭子可吸附更多的生物样本并可达到较高的释放率。?采集鼻咽拭子、口咽拭子中,只能采用无菌的聚酯纤维或人造纤维制成的塑料柄拭子,不能使用藻酸钙拭子或木棒拭子,因为其可能含有灭活某些病毒和抑制 PCR 检测的物质。拭子条应使用可吸附更多生物样本并可达到较高释放率的植绒拭子,棉拭子可能含有对细胞培养有害的物质,且常不能采集到足够量的脱落细胞,不适用于鼻咽或口咽部分泌物的采集。
标本送检?
因病毒活性会随着时间延长而降低,标本采集后应尽快送检。呼吸道标本应在室温下 30 min 内送检,4℃环境下可在 2~4 h 内送 检,来不及处理的标本 4℃保存不应超过 48 h 。如果预计可能延迟 24 h 才能送 检,标本应在-70℃条件下保存,但用于病毒分离的样本不推荐低温冷冻(≤-70℃)。同时标本应避免反复冻融。
微生物标本保存的要求取决于选择的检验项目。对于病毒培养的检验项目,需维持微生物的活力、防止非致病菌污染和过度繁殖;核酸检验尤其是 RNA易受 RNA 酶降解,须使用经高压灭菌或经 RNase 酶清除处理过的无 RNase 酶的一次性耗材。
以上内容摘录自:
1.张海邻, 陈小芳. 儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)[J]. 中国实用儿科杂志, 2018, 33(09):6-11.
2.张海邻, 李昌崇. 《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)》解读[J]. 中国实用儿科杂志, 2019, 34(02):14-18.
来自: 检验星空
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